- 產品品牌： REAGEN
- 產品貨號： RN100FP
- 產品規格： 50/100T
- 產品適用： 本試劑盒適用于體外定量檢測人血清或血漿樣本中的乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）。
- 產地來源： 深圳
- 保質期： 12個月
【產品名稱】
通用名稱：乙型肝炎病毒（HBV）核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規格】
50人份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于體外定量檢測人血清或血漿樣本中的乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈式反應（PCR）結合Taqman技術，對乙型肝炎病毒（HBV）的特異性DNA核酸片段進行熒光PCR定量檢測。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規格 | 數量 | ||
HBV PCR反應液 |
1020μL /管 | 1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、緩沖體系 |
HBV酶混合液 | 26μL /管 | 1管 | Taq酶、UDG酶 |
HBV內參質控品 | 250μL /管 | 1管 | 內標質粒 |
強陽性質控品 | 400μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽性血清 |
臨界陽性質控品 | 400μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽性血清 |
陰性質控品 | 500μL /管 | 1管 | HBV陰性血清 |
HBV定量標準品1（2.0x106 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽性血清 |
HBV定量標準品2（2.0x105 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽性血清 |
HBV定量標準品3（2.0x104 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽性血清 |
HBV定量標準品4（2.0x103 IU/mL） | 250μL /管 | 1管 | 滅活的HBV陽性血清 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個月。本產品反復凍融應不超過5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動醫用PCR分析系統。
【樣本要求】
1.適用樣本類型：人血清或血漿樣本
2.樣本保存與運送：
上述采集的樣本可立即用于檢測，或2-8℃保存（不超過24小時），長期保存請置于-20℃。標本運送用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
將待測樣本、陽性定量參考品、陰性參考品、強陽性參考品、臨界陽性參考品進行同步處理。取200ul樣本各加入內參質控品5ul,按照核酸提取試劑盒說明書進行核酸提取。
2. 試劑配置（在準備區進行，與擴增區分開，冰上操作）
注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，確保試劑完全離心至管底，否則會出現裝量差異的現象。
若有N個待檢測樣本，按下表要求進行擴增反應液的配制，配制完成后充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管20 μl分裝至0.2 ml PCR管中，并做好標記，擴增反應液需現配現用。
N人份(μL) | |
PCR反應液 | N×19.5 |
酶混合液 | N×0.5 |
總量 | N×20 |
3. 加樣（在樣品處理區進行，冰上操作）
按陰性質控品、待測樣品、臨界陽性質控品、強陽性質控品和定量標準品的加樣順序，分別取5μL，加入至已分裝擴增反應液的八聯管中，反應總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心后置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應（在擴增區進行）
選擇FAM通道檢測乙型肝炎病毒（HBV）核酸，選擇CY5通道檢測內標。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數。點擊樣本參數界面，按樣本對應順序設置陰性質控（NTC）、陽性質控以及未知樣本(UNK),陽性定量參考品在“樣本類型”中選擇“標準”，“標準濃度”中輸入濃度。
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 | |
1 | 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測 | 60℃ | 30 sec | |
報告熒光：FAM、CY5；淬滅熒光：NONE。 | ||||
5.質量控制
FAM通道Ct值 | CY5通道Ct值（內部質控品） | |
陰性質控品 | UNDET | ≤35 |
陽性質控品 | ≤35 | — |
定量標準品 | ≤35 | — |
以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進行
6.結果判讀
反應結束自動保存結果，根據分析后圖像調節Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據實際情況自行調整，Start 值可以在3~15、End 值可設在5~20，調整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊Analysis 自動獲得分析結果，在Report 界面觀看結果，記錄未知樣本數值（C）。
試驗結果判斷
6.1如果FAM通道無典型擴增曲線或Ct值>40,CY5通道有典型擴增曲線，Ct值<35,則判定陰性；
6.2如果FAM通道無典型擴增曲線或Ct值>40,CY5通道無典型擴增曲線或者Ct值>35,則需要重新采樣檢測。
6.3如果FAM通道有典型擴增曲線或Ct值≤40，，則按以下方法判斷：
若樣本C<100,則該樣本的HBV DNA濃度<100IU/mL;
若樣本100<C<5.00E+008,則該樣本的HBV DNA濃度=C IU/mL;
若樣本C>5.00E+008,則該樣品的HBV DNA濃度>5x108IU/mL。如果需要精確定量結果，可將樣品用陰性質控品稀釋到線性范圍后再檢測。
【檢驗結果的解釋】
1．實驗室環境污染，試劑污染，樣品交叉污染會出現假陽性結果，如陰性對照檢測為陽性，則需做進一步實驗來確認是哪類污染。如為試劑污染，需開封新的試劑盒再次進行實驗；如為樣品交叉污染，應重復實驗；如為實驗室環境污染，需對實驗室進行徹底清潔或更換實驗室再進行實驗。
2．試劑運輸、保存或配制不當會引起試劑檢測性能下降，出現假陰性結果。如陽性對照檢測為陰性，應開封新的試劑盒再進行實驗。
【檢測方法的局限性】
1. 該試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀或體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。
2. 當樣本的病毒含量低于最低檢出限時，可能會出現假陰性。陰性結果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限，但不能完全排除病毒感染的可能。
【產品性能指標】
1.準確性：企業陽性參考品檢測結果全部為陽性，陽性率為15/15。
2.最低檢測限：該試劑盒最低檢測限為30IU/mL。
3.對不同基因型的覆蓋：本試劑盒對常見的HBV B、C、D型樣本，均可在最低檢出限濃度檢出為陽性。
4.臨床特異性：對10份臨床HBV DNA陰性樣本進行檢測，結果均為陰性。
5.經驗證與下列病原體無交叉反應：甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腺病毒、人乳頭瘤病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、水痘帶狀皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、戊型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、EB病毒、人巨細胞病毒、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌。
【注意事項】
1．請嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。
2．試劑配制建議在試劑配制區進行，樣品處理要求在生物安全柜內操作。臨床實驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規范執行。
3．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。反復凍融可能降低試劑盒靈敏度，請按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
4．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，切忌開蓋。
5．不同批號試劑請勿混合使用，請在有效期內使用試劑盒。
6. 本品僅用于體外診斷。